Presuntamente construida donde se habría alojado San Ambrosio en Florencia en 393, la iglesia se registró por primera vez en 998. Se cree que el primer edificio data del siglo VIII, como una capilla de un convento de monjas construido en honor al santo. Francesco Granacci (1469–1543), pintor italiano del Renacimiento y amigo de toda la vida de Michelangelo Buonarroti, está enterrado en esta iglesia. La iglesia contiene numerosos frescos, retablos y otras obras de arte atribuidas a Andrea Orcagna, Agnolo Gaddi, Niccolò Gerini, Lorenzo di Bicci, Masaccio, Filippo Lippi, Sandro Botticelli, Alesso Baldovinetti, Mino da Fiesole, Cosimo Rosselli, Fra Bartolomeo y muchos otros los artistas La incoronación de la Virgen de Filippo Lippi, ejecutada para el altar mayor de la iglesia en 1441-1447, se encuentra ahora en los Uffizi.